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猪圆环病毒2型重组Cap蛋白在昆虫杆状病毒中的表达

刘长明  陆月华  张超范  刘焕章  
【摘要】:猪圆环病毒2型(PCV2)基因组包含2个开放阅读框架(ORFS),其中ORF1编码病毒复制相关蛋白(Rep),ORF2编码病毒衣壳蛋白(Cap)。为了在昆虫细胞表达Cap蛋白,本研究采用PCR扩增PCV2-ORF2编码基因,将PCR产物插入到昆虫杆状病毒转移载体上,经酶切反应及DNA序列分析得到验证。重组质粒与昆虫杆状病毒线性基因组混合,转染到昆虫细胞(Sf-21)进行基因重组,经3次病毒蚀斑克隆,获得高效表达Cap蛋白的重组杆状病毒,毒价可达1.28×108 pfu/ml。采用SDS-PAGE凝胶电泳分析表明,重组Cap融合蛋白分子量为32.8 kDa,占总蛋白含量的17.2%。免疫印迹试验分析表明,重组Cap蛋白与PCV2阳性血清发生特异性反应,证明该重组蛋白具有良好的免疫活性反应。本研究为进一步进行该病毒分子诊断、亚单位疫苗以及分子生物学等研究奠定了基础。

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