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PRRSV GP5蛋白的高效表达、纯化与结构分析

黄金海  杨汉春  郭鑫  陈艳红  韩军  
【摘要】:应用不同引物将PRRS BJ-4毒株ORF5缺失信号肽的dE基因及其缺失突变体dEM分别克隆至原核高效表达载体pGEX-6P-1中,获得重组质粒pGEX-6P-dE、pGEX-6P-dEM,转化大肠杆菌BL21细胞,经诱导获得重组融合蛋白(GsT-dE,GST-dEM),表达量分别为16%,32%。分别经包涵体变性、复性,GST亲和层析、凝胶层析等获得纯化的重组蛋白GST-dEM、GST-dE。应用圆二色谱(CD)测定纯化的GST-dE,GST-dEM蛋白,计算相应的二级结构组成,结合生物信息学分析,绘制出GP5蛋白的二级结构图。分析结果表明,PRRSVGP5重组蛋白α螺旋、β折叠、转角、无规则卷曲分别为58 aa,56 aa,14 aa和72 aa,进一步从结构的角度分析了PRRSV GP5蛋白结构与其功能的关系。

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