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犬新孢子虫(Neospora caninum)NcSRS2基因的克隆与融合蛋白的表达

余劲术  刘群  
【摘要】:本研究用新孢子虫Nc-1株接种小鼠,分离脑组织,从脑组织中提取虫体的RNA,对已知的新孢子虫NcSRS2基因序列进行部分取舍,用RT-PCR 方法扩增并克隆出截短的NcSRS2基因,插入到pGEX-6p-1质粒的多克隆位点,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,于氨苄阳性LB 培养平板上筛选阳性克隆,酶切及PCR 鉴定;经IPTG 诱导在E.coli 中表达,用SDS-PAGE 和免疫印迹分析并纯化表达产物。结果表明,NcSRS2基因体外扩增产物与预期值相符,约1041bp;所构建pGEX-6p-NcSRS2重组质粒阳性克隆经双酶切与PCR 鉴定,与预期结果一致;SDS-PAGE 和免疫印迹显示,表达融合蛋白产物约为62.6kD,表达效率为32.3%;并对表达的融合蛋白进行纯化。

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