大熊猫犬冠状病毒S基因的扩增、克隆与序列分析

【摘要】：从重庆某动物园死亡的大熊猫肝脏中分离到一株病毒,经鉴定为犬冠状病毒(命名为CCV DXMV)。本实验根据CCV K378和CCV Insavc-1株基因序列设计合成了普通PCR引物SF1-SR1和SF2-SR2,以及半套式引物SF3-SR3、SRI3、SFL、SF1-SR1和SFI4,分段扩增了CCV DXMV 81-1 166位以外的S基因,得到了368bp、792bp、737bp、1 178bp和985bp 5个基因片段。将纯化的RCR产物分别克隆到pGEM-T载体中,通过筛选和鉴定,获得了S基因的克隆质粒,将阳性重组质粒送生物公司测序。将CCV DXMV和其它株CCV及TGEV HN2002和FIPV 79-1 146的全S基因序列进行分析比较,并绘制了进化树。结果表明,该株病毒与CCV K378的同源性最高,达到99.4%;而与CCV 23/03的同源性最低,为56.9%;与FIPV和TGEV分别有90.4%和82.1%的同源性。