SARS冠状病毒N蛋白基因的克隆、序列分析及其在E.coli中的表达与初步应用

【摘要】：对SARS核蛋白基因进行了克隆和序列测定。根据GenBank中报道的SARS-Tor2株核蛋白基因(N)序列,设计了一对特异性引物,对SARS病毒进行了RT-PCR扩增;将扩增得到的PCR产物纯化后与pGEM-T连接得到重组质粒pGEM-N,进行核苷酸序列测定,并与SARS其他3个标准毒株的N基因进行了比较。结果该基因全长1269bp,编码422个氨基酸,核苷酸的同源性为100%;推导的氨基酸序列的同源性为100%。将pGEM-N双酶切,回收目的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中,构建了重组质粒pET-N,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG进行了诱导。结果重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子量为53 kDa的重组蛋白,免疫印迹法证实该重组蛋白可以与SARS免疫血清发生特异性反应。经凝胶薄层扫描,重组N蛋白表达量可占菌体蛋白的43%。初步建立了用N蛋白检测SARS冠状病毒的间接ELISA方法。