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SARS冠状病毒S蛋白抗原表位的分析研究

华荣虹  周艳君  王云峰  华玉卓  童光志  
【摘要】:SARS-CoV的纤突蛋白(Spike protein)是病毒粒子的一种主要结构蛋白。它在介导病毒粒子与宿主细胞受体的结合以及诱导中和抗体中起重要作用。在本实验中我们通过生物信息学分析并预测了6个纤突蛋白B细胞表位(S1 S2 S3 S4 S5 S6)。利用6个预测的表位我们首先构建了一个多表位嵌合基因,多表位嵌合基因合成后插入原核表达质粒pGEX-6p-1的多克隆位点BamHI与XhoI之间,构建成GST融合表达质粒。重组质粒转化宿主茵BL21后经IPTG诱导后得到了高效表达。Western blot分析结果表明重组融合蛋白可与SARS病人康复血清反应。用重组融合蛋白为抗原制备了一系列单克隆抗体。将6个预测表位分别与GST融合表达。在这6个融合蛋白中GST-S5可以和单克隆抗体D3C5反应,GST-S2可以和单抗D3D1反应。Western blot分析表明两个单抗所识别的表位均为线性表位。两个表位分别位于SARS-CoV纤突蛋白的第447至458氨基酸残基和789至799氨基酸残基。D3D1表位(447-458)正位于S蛋白与受体结合的结构域中。该研究可以为进一步分析SARS-CoV纤突蛋白功能以及防治SARS的研究提供基础。

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