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竞争性RT-PCR法检测铜对CtrlmRNA表达的影响

付世新  梁海涛  朱世成  王哲  张艳宇  刘国文  
【摘要】:用竞争RT-PCR法检测铜对猪传代肾细胞(PK15)中特异性铜转运蛋白Ctrl基因mRNA表达水平的影响。经两次克隆,将筛选出的一段400 bp的核苷酸序列插入RT-PCR扩增出的530 bp Ctrl目的片段中,构建了插入突变型Ctrl-cDNA竞争模板。再将竞争模板与各试验组cDNA同时进行PCR扩增。结果表明,在铜添加浓度为7.8×31.2μmol/L时,猪肾PK15细胞Ctrl基因mRNA表达量随铜添加浓度的升高而减少;当铜添加浓度达到62.5μmol/L时,其表达量又有所回升,呈双相反应。

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