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LA-PCR快速克隆传染性法氏囊病病毒基因组A节段全长cDNA方法的建立

李建荣  于涟  黄耀伟  谢荣辉  郑筱祥  
【摘要】:正 从浙江省某鸡场暴发疑似IBD的法氏囊病料中分离到一株致死率高达70%的强毒株(IBDV-ZJ2000),分别用蛋白酶K裂解法、异硫氰酸胍法、Trizol法从病变的法氏囊中提取病毒双股双链RNA,经LiCl纯化后去除宿主RNA,均可见大小分别为3.3kb(A节段)和2.9kb(B节段)的片段。但质量和产量以蛋白酶K裂解法最高。以蛋白酶K法提取的病毒基因组RNA,优化各种反应参数和条件,建立LA-PCR一步直接扩增IBDV A节段

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