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MDV囊膜糖蛋白Ⅰ原核表达产物单克隆抗体的制备

韩凌霞  陈雷  丁家波  刘岳龙  秦爱建  
【摘要】:用大肠杆菌BL21表达了马立克氏病病毒(MDV)特超强毒648A株的囊膜糖蛋白I(gI)完整基因,通过SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分离相应的蛋白条带,切下并磨碎后作为免疫原免疫小鼠,制备单克隆抗体。共得到3株间接免疫荧光(IFA)阳性的单克隆杂交瘤细胞株6F10、2H3、2H7,分别与MDV不同致病型的毒株CVI988、CA、RB1B、MD11、648A株感染的CEF测IFA,均呈现特异性荧光。制备了腹水,用PBS1:50、1:100、1:200、1:400、1:800、1:1600、1:3200稀释后,测IFA效价分别为1:1600、1:800、1:800。6F10腹水经PBS(含10%脱脂乳)1:150稀释与MDV感染的CEF做dot—ELISA和Western—blot,以未感染病毒的CEF裂解产物做对照,以碱性磷酸酶标记的羊抗鼠IgG为二抗(1:1000, Sigma),NBT、BCIP配制显色底物液,病毒所在部位呈特异性棕色,在Western—blot中出现一条特异性条带,而在对照中未出现特异性显色。这些单抗将能用于阐明不同MDV毒株中糖蛋白gI的表达与毒株致病型间是否存在一定关系,并为研究MDVgI在病毒感染细胞中的作用提供了基础。

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