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Ⅰ型马立克氏病病毒特异性核酸探针试剂盒的制备

吉荣  崔治中  秦爱建  丁家波  刘岳龙  金文杰  
【摘要】:本文运用非放射性的地高辛标记法来标记Ⅰ型马立克氏病病毒特异性DNA(约0.5kb),该DNA通过EcoRI位点克隆进pUC18载体。该通过优化核酸探针标记、检测的步骤,建立了马立克氏病的诊断试剂盒。该探针在1:1250的工作浓度下,能检出1—2pg/ul的马立克病病毒基因组DNA,说明探针具有较好的灵敏度;该探针只与Ⅰ型马立克氏病病毒发生反应,与其它病毒DNA如鸡传染性贫血病毒(CAV)基因组DNA、禽网状内皮增生症病毒(REV)cDNA、鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)基因组RNA、SPF鸡基因组DNA以及Ⅱ型、Ⅲ型马立克氏病病毒等不发生反应,这说明该探针具有较好的特异性。该试剂盒稳定性较好,可重复使用,探针工作液使用3次时仍能检测到1—2pg/ul的马立克病病毒基因组DNA。总之,该探针初步具备了诊断试剂盒的基本要求,可在基层推广使用,可用在非Ⅰ型马立克氏病疫苗免疫的鸡群的检测,同时还可用于马立克氏病病毒血症的动态检测。

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