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IBDV VP2/VP0基因在重组鸡痘病毒中的表达及实验免疫研究

金宁一  刘毅  郭志儒  方厚华  古长庆  罗坤  夏志平  
【摘要】:以FPV 282E4株TK基因为侧翼,分别将IBDV VP2和VP243目的基因克隆到牛痘病毒A型包涵体(ATI)和痘苗病毒P7.5复合型启动子下游,构建成2个重组表达质粒,命名为pUTALacVP2和pUTALacVP0。用脂质体法转染CEF细胞,通过X—gal染色,蓝斑筛选、纯化,获得2株重组鸡痘病毒vUTALacVP2和vUTALacVP0。经免疫荧光染色观察、ELISA检测、SDS—PAGE和Western blot鉴定,证明重组鸡痘病毒(rFPV)vUTALac VP2和vUTALacVP0能在CEF细胞中高效表达目的蛋白。 将上述rFPV经翅膀刺种途径,注射1周龄SPF鸡20只,同时用常规IBDV中强毒二价活疫苗口服免疫对照组,进行保护性及免疫原性实验。与常规疫苗相比,重组疫苗对vvIBDV攻毒的保护率稍低。攻毒前,常规疫苗组抗体水平高于实验组,攻毒后第5天,实验组抗体水平迅速提高,VP243组高于VP2组。以ConA和LPS作为促有丝分裂原,观察攻毒前后鸡脾淋巴细胞反应。攻毒前,常规疫苗免疫组鸡脾淋巴细胞转化率稍高于重组疫苗和基因疫苗免疫组;攻毒后,后者显著高于前者。

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