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鸡传染性鼻炎PCR试剂盒和阻断ELISA试剂盒的研制与应用

张培君  陈小玲  苗得园  宋程  龚玉梅  刘钧贵  刘分红  
【摘要】:本研究在作者建立的PCR和单抗阻断ELISA(B—ELISA)方法的基础上成功研制出鸡传染性鼻炎PCR试剂盒和阻断ELISA试剂盒。PCR试剂盒可直接检测病料中的病原DNA,可测出1Pg的DNA和10~2~10~3细菌,对可疑病料的检出率是传统的细菌分离方法的2~3倍,对常见病原菌(非Hpg)的检测结果均为阴性。可重复性好,特异性为100%,在4℃可保存12个月,在-20℃可保存15个月,在室温(20℃~25℃)可保存至少7天。阻断ELISA试剂盒可检测副鸡嗜血杆菌(Hpg)型特异性抗体,其种特异性为100%,型特异性99%,且具有较好的敏感性,重复性好,在对临床病鸡、人工感染鸡和免疫鸡的检测中,A型检出率可高达75%至90%,C型的检出率也可达到60%。试剂盒在37℃可保存7天以上,4℃可保存10个月,-20℃可保存1年以上。另外本研究还采用两种试剂盒对人工感染鸡的排毒曲线和抗体消长动态等进行了研究,为本方法在临床上应用提供了参考。在北京、河北、山东等10多个省、市、区收集菌株和可疑病料155份、血清2191份,用这两个诊断试剂盒进行了检验,PCR的阳性检出率为32.3%,A型抗体阳性检出率为27.4%,C型抗体阳性检出率为11.5%。结果表明我国鸡传染性鼻炎的发生已较为普遍,不但存在A型菌感染,也存在着C型菌的感染。

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