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三角花转移抗冻蛋白基因研究

陈香波  罗玉兰  何玉科  
【摘要】:正 三角花(Bougainvillea ssp.)为紫茉莉科九重葛属木质藤本灌木,在我国热带、亚热带地区普遍种植,园林应用极为广泛,而在气候较为寒冷的北方地区(年极端最低温度O℃以下)均无法露地安全越冬。一直以来由于抗寒种质的缺乏以及自然条件下多数品种不结实等因素,制约着三角花抗寒育种工作的开展。本研究在掌握较抗寒品种的基础上,进行了抗冻蛋白基因(AFPs)针对三角花的遗传转移工作。目标基因为从极地昆虫Choristoneura fumiferana.中发现的一种抗冻蛋白(分子量9kDa)基因,将该基因置于烟草分泌信号肽PR-S基因之后构成融合蛋白基因PRSThp Ⅰ,经克隆插入农杆菌双元载体pCAMBIA1201的衍生质粒构建成植物表达双元载体pYFThP Ⅰ。采用茎段共培养方法,切取艳紫三角花(B.glabra cv.Sanderiana.)带芽茎段放入过夜培养的农杆菌中浸泡10min,吸干多余菌液后放入分化培养基预培养2天,转接至筛选培养基(分化培养基附加50mg/LKm和100mg/L Cb),大约12天左右茎节(芽基)周围就会出现不定芽发生,经初代筛选存活的抗性芽二次继代筛选,转入生根培养基,共获得6株抗性芽。抗性芽生根移栽,采取叶片抽取总DNA,PCR扩增鉴定初步证实其中3株为转基因苗。这是国内首次针对木本观赏植物进行的抗寒基因工程育种实践,采用昆虫抗冻蛋白基因进行遗传转移国际上也不多见,本研究建立的农杆菌遗传转化体系对于今后进一步尝试其它植物、采取其它基因都具有重要意义。

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