收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

豌豆轻型褪绿病毒P0蛋白抑制子功能的初步分析

孙倩  卓涛  周翠姬  李源源  向海英  王颖  张宗英  李大伟  于嘉林  韩成贵  
【摘要】:豌豆轻型褪绿病毒(Pea mild chlorosis virus,PMCV)是我们实验室首次在豌豆和蚕豆植株上检测到的一种新病毒,属于黄症病毒科(Luteovidea)马铃薯卷叶病毒属(Polerovirus)。PMCV编码产生的P0蛋白是目前该属已报道的编码最大的蛋白,其编码产生271 aa。同马铃薯卷叶病毒属部分病毒编码产生的P0蛋白一样具有基因沉默抑制子的功能。为了进一步验证P0~(PM)的作用机制,我们利用农杆菌共浸润接种转基因本生烟16C的方法鉴定P0~(PM)的抑制子活性。结果表明P0~(PM)能抑制由单链GFP诱发的局部转录后基因沉默,但不能抑制系统转录后基因沉默。通过酵母双杂交实验表明,P0~(PM)能够和拟南芥ASK1蛋白互作。并且通过共浸润接种本生烟的实验证明,P0~(PM)也能够介导拟南芥AGO1蛋白的降解。通过对P0~(PM)氨基酸序列的二级结构分析,发现其N端前20个氨基酸和C末端9-41个氨基酸仅形成α螺旋或者不规则的亮氨酸拉链结构。因此,我们进一步分别对N端和C端进行了截短突变分析,以研究N端和C端氨基酸对抑制子活性的影响。N端截短突变分析结果表明,单独缺失N端第二个和第三个氨基酸就会使P0~(PM)抑制子活性完全丧失,说明N端氨基酸对抑制子活性的重要性。C末端截短突变结果表明,当缺失C末端229-271位氨基酸时,P0~(PM)抑制子活性丧失,而当C末端缺失230-271位氨基酸时,P0~(PM)依然具有抑制子活性,其活性与野生型P0~(PM)活性相当。研究表明,F229位的苯丙氨酸对P0~(PM)抑制子功能的发挥是至关重要的,推测其与P0~(PM)二级结构以及构象的形成有关。由于至今还没有P0蛋白的晶体结构解析,本实验获得的一些突变体结果能够为进一步研究P0沉默抑制分子机制提供参考数据,有助于该属病毒P0蛋白抑制子作用机制的深入研究。

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前11条
1 孙威;姜晶;;植物转化酶蛋白抑制子研究进展[J];北方园艺;2008年02期
2 姜晶;李冬妮;孙威;;番茄转化酶抑制子基因克隆及其表达分析[J];植物生理学通讯;2009年03期
3 李茶姿;苗爽;杨玲;王长春;;植物蛋白酶抑制子的抗病性研究[J];浙江农业科学;2013年08期
4 向东,黄惠华,赖凤英;热处理钝化扁豆液中胰蛋白酶抑制子的研究[J];食品科学;2003年05期
5 陈中,杨晓泉,彭志英;豆类植物胰蛋白酶抑制子及其钝化酶研究进展[J];武汉工业学院学报;2000年02期
6 杜娟;柴友荣;;植物转录抑制子的结构特征及其作用机理[J];植物学通报;2008年03期
7 崔晓峰,周雪平;RNA沉默的病毒抑制子[J];生物化学与生物物理进展;2005年03期
8 张梅,朱柞铭;丝氨酸蛋白酶抑制剂的研究及应用[J];生物化学与生物物理进展;1996年03期
9 苏泼曼;;科学家发明了激活基因的开关和定时器[J];国外医学情报;2001年04期
10 郑玉姝;赵朴;刘兴友;;病毒逃避RNAi的策略[J];生物化学与生物物理进展;2007年12期
11 ;[J];;年期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 陈中;酶钝化豆类种子胰蛋白酶抑制子的研究[D];华南理工大学;2000年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 张剑锋;CMV 2b蛋白的原核表达纯化及融合策略增强抑制子活性初探[D];吉林大学;2006年
2 赵丽玲;Alphasatellite编码的Rep蛋白抑制子活性鉴定及其病害复合体相互关系研究[D];浙江大学;2013年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978