收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

玉米弯孢霉叶斑病菌毒素相关基因与色素相关基因相互关系研究

荆晶  刘铜  范莉莉  刘力行  陈捷  
【摘要】:玉米弯孢霉叶斑病菌(Curvulaira lunata)产生的毒素和黑色素均是重要的致病因子,因此研究毒素合成相关基因Clt-1和黑色素形成相关基因Brn1的相互关系,有助于更全面揭示弯孢霉叶斑病菌的致病机理。根据已知的Brn1基因序列作为探针,通过Southern blotting确定了Brn1基因以单或多拷贝的形式存在于基因组中,为此,以质粒pSilent-1为基础构建了Brn1基因的RNA干扰载体pSilentBrn1-2,并利用原生质体-氯化钙-聚乙二醇(CaCl_2-PEG)转化方法获得了10个抗潮霉素的转化子,其中转化子T2、T4、T5在菌丝颜色上表现出不同程度的白化现象。通过转化子Southern blotting和RT-PCR验证,发现其干扰载体pSilent-brn1中Brn1基因序列的发夹结构已经整合到基因组中,并且Brn1基因表达有不同程度被抑制,其中转化子T5中Brn1基因表达被沉默程度达79%,菌落表现红棕色,边缘出现白化,表明DHN黑色素合成过程中受阻。通过TLC检测发现T5不能产生所鉴定的毒素分子—(甲基-(5羟甲基)呋喃-2-羧酸盐)。综上述表明:Brn1基因不仅是弯孢霉叶斑病菌黑色素合成途径中关键基因,而且还参与了毒素合成代谢的调控。为了进一步明确两基因是否存在直接的互作关系,本研究正在利用酵母双杂交方法进行研究。已开展工作如下:以玉米弯孢霉叶斑病菌野生菌株CX-3为试验材料,收集生长两天的菌丝提取总RNA,通过RT-PCR得到cDNA,以此为模板用高保真酶扩增出Brn1和Clt-1目的片段,加A尾后做T-A克隆,转化感受态大肠杆菌DH5α,做菌落PCR后并将阳性菌种保存。进一步验证是否连上T载体,即提取质粒后进行酶切,发现目的片段后进行测序,测序结果正确,于是将质粒与相应载体分别酶切并进行连接,构建pGBKT7-Brn1和pGADT7-Clt-1融合质粒。再将融合质粒转入感受态DH5α,将可能含有pGBKT7-Brn1融合质粒的DH5α涂布于含有卡那霉素平板,而pGADT7-Clt-1则涂布于氨卞霉素平板,挑选阳性克隆并做菌液PCR,确认为阳性后提取融合质粒转入酵母菌株AH109中,涂板,共4种平板(-Trp-Leu-Trp-leu-Trp-leu-His-Ade),四缺板上的单菌落再进行X-a-gal显示验证。

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 刘岩;姚强;宫志远;高兴喜;韩建东;任鹏飞;张雪梅;任海霞;李瑾;曲玲;;扩张蛋白Swollenin基因香菇表达载体构建及其初步转化[J];食品科学;2011年11期
2 季思思;朱义广;彭东海;阮丽芳;孙明;;苏云金芽胞杆菌质粒p26复制功能区的克隆[J];华中农业大学学报;2011年05期
3 彭苗苗;李晓玲;张德春;;毕赤酵母转化子表型的菌落PCR鉴定方法研究[J];江苏农业科学;2011年03期
4 司微;刘慧芳;王春来;彭玮;赫明雷;杜艳芬;赵海玲;王聃;杨金国;林靖凯;倪洪波;刘思国;;利用Red重组系统敲除大肠杆菌菌株ClpP基因方法的研究[J];黑龙江畜牧兽医;2011年15期
5 于长燕;郑秀;朱燕;孟庆艳;王梦晓;高强;;肉葡萄球菌tat-gfp融合基因的构建与表达[J];生物技术通报;2011年08期
6 魏尧;李振;许庆方;;简析影响乳杆菌电转化效率的因素[J];山西农业科学;2011年09期
7 王旭静;董雷;苗猛猛;唐巧玲;王志兴;;转豇豆胰蛋白酶CPTI基因棉花检测用标准分子的制备[J];中国生物工程杂志;2011年08期
8 张伟;陈祈磊;朱宝泉;胡又佳;;点突变对高加索乳杆菌醇脱氢酶酶活的影响[J];生物技术通报;2011年09期
9 王培培;郭庆港;李社增;鹿秀云;李宝庆;张莉萍;马平;董金皋;;枯草芽孢杆菌NCD-2菌株的高效电击转化[J];中国生物防治学报;2011年03期
10 何超军;邱杨玉;毛芝娟;陈吉刚;吴志新;;哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK真核表达载体构建及在毕赤酵母中的表达[J];华中农业大学学报;2011年05期
11 李忠清;王亮;;抗菌肽牛乳铁蛋白肽衍生肽在毕赤酵母中的表达及活性鉴定[J];生物技术通报;2011年06期
12 黄梦;于海;周艳君;李泽君;马继红;杨馥如;童光志;;H1N2亚型猪流感病毒反向遗传操作系统的建立[J];中国动物传染病学报;2011年03期
13 高必达;钟杰;赵慧茹;;荧光蛋白报告基因在植物寄生真菌研究中的应用[J];生物技术通报;2011年09期
14 杨峰;施李鸣;范素华;谭俊;谢涛;商巾杰;陈保善;;板栗疫病菌绿色荧光与红色荧光蛋白共定位载体的构建[J];基因组学与应用生物学;2011年03期
15 陈慧杰;刘晓艳;曹诗云;阮丽芳;孙明;;苏云金芽胞杆菌CT-43内生质粒pBMB0558上virD4基因的功能[J];华中农业大学学报;2011年04期
16 林湛松;王小明;龚殿;刘志昕;;香蕉条斑病毒ORF Ⅰ、ORF Ⅱ酵母双杂交系统诱饵质粒的构建及鉴定[J];热带农业科学;2011年06期
17 陈妮;左国伟;潘玥;赖国旗;杨根岭;向廷秀;韩建红;黄云;;小鼠CHD5基因siRNA重组腺病毒载体的构建及鉴定[J];西南大学学报(自然科学版);2011年08期
18 张月娟;万一;陈华民;张琨;赵廷昌;;Lescpth5诱饵载体的构建及其自激活作用的检测[J];安徽农业科学;2011年19期
19 贾小霞;文国宏;李高峰;李建武;齐恩芳;张荣;王一航;;拟南芥DREB1A基因的克隆与植物表达载体构建[J];甘肃农业科技;2011年06期
20 徐涛;林艳青;王晓钰;吴婷;韩哲;张希敏;杨雪松;王丽京;;Scribble在原肠期鸡胚表达的研究[J];生物技术通报;2011年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 荆晶;刘铜;范莉莉;刘力行;陈捷;;玉米弯孢霉叶斑病菌毒素相关基因与色素相关基因相互关系研究[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
2 肖杰;;链霉菌中高频率的质粒同源性重组[A];生命科学与生物技术:中国科协第三届青年学术年会论文集[C];1998年
3 周利刚;向华;;极端嗜盐古菌隐蔽型质粒pZMX101的研究[A];第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集[C];2006年
4 马苏;姜平;段舒怡;李玉峰;;猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白中和性单克隆抗体研制[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会论文集[C];2006年
5 吴丛梅;殷玉和;韩依辰;;药用级含IL-24基因质粒提取工艺的研究[A];吉林省第六届生命科学大型学术报告会论文集[C];2008年
6 吴淑燕;宋国蓉;眭阳;李嫄渊;吕杰;李琼;黄瑞;;伤寒沙门菌质粒pR_(ST98)与巨噬细胞自噬和凋亡关系的研究[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
7 朱建国;周杨;段新平;张明军;李莉;王铁东;逄大欣;欧阳红生;;绿色荧光蛋白基因体外转录质粒的构建[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
8 陆正齐;朱灿胜;刘然义;谢发君;胡学强;;质粒pAAV-MCS转导的骨髓间充质细胞导向的CNTF基因靶向性治疗慢性进展型多发性硬化[A];第九次全国神经病学学术大会论文汇编[C];2006年
9 胡晓敏;袁永明;袁志明;;苏云金杆菌杀虫质粒在敏感昆虫体内体外的结合转移研究[A];第十届全国杀虫微生物学术研讨会暨全国生物农药与化学生物学研究与产业化会议论文摘要集[C];2006年
10 程时丹;王晓瑾;乔敏敏;周季兰;吴云林;;Smad4基因抑制人类胃癌细胞株生长作用的实验研究[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘小锦;苏云金芽胞杆菌菌株YBT-1520基因组中TA系统的研究[D];华中农业大学;2008年
2 涂昀;纤维堆囊菌基因转化体系建立及埃博霉素生物发酵和纯化工艺研究[D];重庆大学;2007年
3 梁小燕;抑癌基因LKB1调控细胞周期分子机制研究[D];重庆医科大学;2010年
4 刘光磊;海洋微生物多糖水解酶的基因克隆和高效表达[D];中国海洋大学;2012年
5 白小佳;酿酒酵母Ras2蛋白的功能研究[D];天津大学;2007年
6 徐元喜;Cytophaga hutchinsonii遗传操作体系的建立及应用[D];山东大学;2012年
7 徐娟;肠道病毒EV71 VP1基因的优化和免疫原性的研究[D];南京医科大学;2011年
8 杨波;阻断TGF-β信号通路增强NK-92细胞过继性治疗的抗肿瘤效应[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年
9 王荫榆;有关乳酸菌质粒和表达体系的研究[D];复旦大学;2003年
10 刘增然;利用淀粉的酿酒酵母工程菌的构建[D];四川大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 彭冉;抗铅联合苯酚降解多功能菌的构建[D];安徽农业大学;2010年
2 韩爽;玉米纹枯病菌内切多聚半乳糖醛酸酶基因的克隆表达及致病性分析[D];山东农业大学;2011年
3 董流昕;转基因抗草甘膦大豆参比分子的构建[D];北京林业大学;2005年
4 曹鹏;人脑胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)原核表达载体的构建及蛋白表达的鉴定[D];第二军医大学;2009年
5 胡伶俐;牛杀菌—通透性增加蛋白和防御素基因融合质粒的构建及其在大肠杆菌中表达[D];华中农业大学;2010年
6 佘其美;TNF-α、胰岛素和地塞米松对稳定表达人脂联素3T3-L1细胞PPAR-γ2mRNA表达的影响[D];安徽医科大学;2005年
7 牛牛;COX-2基因和肺癌相关性研究[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2006年
8 田海山;酸性成纤维细胞生长因子发酵工艺的优化[D];吉林大学;2007年
9 蔡燕飞;P-糖蛋白mRNA中IRES序列分析及与肿瘤多药耐药性关系研究[D];江南大学;2011年
10 高卓;侧脑室注射质粒pLXSN介导Bcl-2基因对大鼠脑梗塞及BDNF影响的研究[D];中国医科大学;2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 刘霞;美利用质粒制造诱导多功能干细胞[N];科技日报;2009年
2 农业部饲料工业中心 陆文清博士;使用饲用抗生素危害到底有多大[N];中国畜牧兽医报;2005年
3 Wang Johson译;非病毒游离质粒基因载体技术获美国专利[N];中国高新技术产业导报;2002年
4 直尺编译;健康新武器——D N A疫苗[N];科技日报;2002年
5 卢苏燕;研究显示鼠疫杆菌有向抗多药性发展的危险[N];医药经济报;2007年
6 吴一福;PTFE血管材料可携载VEGF基因转染[N];中国医药报;2006年
7 付毅飞;建造极端微生物“细胞工厂”[N];科技日报;2004年
8 ;放线共生放线杆菌黏附性研究[N];科技日报;2006年
9 陆志城;安普霉素让抗生素寿命延续[N];医药经济报;2004年
10 丁香;基因工程让蘑菇成为制药厂[N];中国医药报;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978