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利用padlock探针结合Macroarray技术对几种重要植物病原细菌的高通量检测

田艳丽  孟军  范家勤  胡白石  刘凤权  
【摘要】:高通量是目前植物病原菌分子检测的发展方向,而基于PCR扩增的普通分子检测一次无法检测多种病原菌。因此,发展高通量检测方法对于农业生产和口岸检疫具有重要意义。分子探针和Macroarray、Microarray等技术的出现为发展植物病原菌高通量检测提供了新思路和方法。Padlock探针是一种长的寡核苷酸探针,其两端序列可通过核酸间的互补与靶标DNA序列结合。Padlock探针不仅具有高的特异性,同时还可与Macroarray或Microarray技术结合进行高通量检测。本研究设计了6种重要植物病原细菌的padlock探针,并对这些探针的特异性和灵敏度进行了验证。试验结果表明,所设计不同病原菌探针只能从对应的病原菌DNA中扩增出目的片段,而在非目的病原菌的DNA中不能扩增出片段。不同病原菌探针的灵敏度分别为10pg和1pg。将设计的padlock探针与Macroarray技术相结合,通过一次扩增能够同时检测这六种植物病原细菌,开发了植物病原细菌的高通量分子检测技术。本研究建立的高通量分子检测技术可望应用于口岸和田间对这些植物病原菌的检测。

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