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农杆菌介导的板栗疫病菌诱变研究

姚姿婷  周燕  蓝秀万  李敏慧  姜子德  陈保善  
【摘要】:低毒病毒/板栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)系统是一个具有独特优点的研究病毒与宿主相互作用的模型系统。根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的真菌遗传转化因具有操作简便,转化效率高,容易得到单拷贝随机插入的转化株,并且转化子稳定等特点而成为近年来真菌遗传转化的主要研究手段之一。我们以根癌农杆菌质粒 pTHPR-1双元质粒载体为基础构建了含有由构巢曲霉(Neurospora crassa)TrpC 启动子驱动的潮霉素或 G418抗性基因的双元载体 pTHKR1和 pTGKR1,将该双元载体导入根癌农杆菌 AGL-1转化板栗疫病菌分生孢子,构建了由根癌农杆菌介导板栗疫病菌转化系统。由农杆菌介导转化板栗疫病菌 EP155分生孢子获得了 10310个转化株,其中有248株发生明显表型变化,突变表型主要有6类:Ⅰ.菌落变小(72个);Ⅱ.不产孢(20个);Ⅲ.菌落颜色变白(128个);Ⅳ.色素加深(6个);Ⅳ.无气生菌丝(22 个)。对28个突变株进行 Southern 杂交鉴定,79.31%为 T-DNA 单拷贝插入。

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