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放线菌菌株Y23发酵液的理化性质及抑菌活性物质的分离纯化

李璐宁  贾春燕  张茹萍  郑洪波  张广民  
【摘要】:放线菌在自然界中分布广泛,其许多种类在代谢活动中能够产生抑菌活性物质。目前抗生素中由放线菌产生的约占2/3。因此,从放线菌中寻找利用抑菌活性物质是植物病害生物防治的重要途径。Y23菌株从采自山东临沂地区的烟田土样中分离得到,并且明确了其抑菌活性物质主要存在于该菌株的发酵上清液中。本研究以该菌株的发酵上清液为试材,以烟草青枯病菌为指示菌,采用琼脂扩散法研究了该菌株发酵上清液的理化性质,测定了其贮藏稳定性、酸碱稳定性、加热稳定性和光照稳定性;采用有机溶剂萃取法,利用5种常见的溶剂(石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、苯)按V(发酵液):V(溶剂)=3:1进行萃取,并配合生物活性测定确定该活性物质的最佳萃取剂;萃取物用甲醇溶解,采用硅胶柱层析以不同比例的异丙醇一石油醚系统梯度洗脱,配合薄层层析活性追踪探索该活性物质的分离纯化条件;利用高效液相色谱技术检测该活性物质纯度。理化性质测定结果表明:发酵液低温贮藏效果好,在4℃下有效贮藏期在1个月以上;在中性及28℃下抑菌活性最强,在酸碱环境(pH值4或pH值10)及加热到90℃以上时活性有所衰减,但衰减幅度不超过对照的20%;紫外光、日光分别照射9h后,发酵液活性仍保持在对照的75%以上。理化性质测定表明该菌株发酵液中抑菌活性物质性质稳定,适应范围较广,具有提取分离价值。有机溶剂萃取表明:乙酸乙酯为最佳萃取剂,萃取液旋转蒸发后得到褐黄色萃取物。分离纯化实验表明:硅胶柱层析梯度洗脱可将活性物质与绝大部分色素分开;以V(石油醚):V(异丙醇):V(甲醇)=10:1:0.5为展开剂进行薄层层析分离效果最好,活性分离物(Rf=0.32)浸提后得到无色晶体,经高效液相色谱分析可知其纯度达95%以上。从而为进一步研究该活性物质的结构和性质奠定了基础。

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