巨大口蘑原生质体制备工艺优化

【摘要】：巨大口蘑(Tricholoma giganteum Massee)是一种具有巨大市场潜力且营养丰富的食用兼药用的珍稀食用菌。但由于巨大口蘑栽培生长周期较长,制约了巨大口蘑工业化与规模化发展。本研究通过均匀设计等方法对巨大口蘑原生质体的制备工艺进行了探讨与优化,以期得到足够量的巨大口蘑原生质体,为巨大口蘑原生质体融合奠定基础和提供材料。研究了酶液、菌龄、酶处理的时间和温度、稳渗剂以及其他因素对巨大口蘑原生质体的形成和再生的影响。建立了巨大口蘑原生质体的紫外辐照诱变体系。结果表明:巨大口蘑原生质体制备的最佳条件是以0.5mol/L的甘露醇配成的浓度为5%复合酶(纤维素酶、蜗牛酶)、菌龄4天、酶解温度31℃、酶解时间4.5h。在此条件下,可获得巨大口蘑原生质体产量最高,为7.0×10~6。原生质体再生率为1.167%。