Rim101和Crz1转录因子在碱性pH条件下对白念珠菌胞内钙波动的协同调控作用

【摘要】：在人体致病性真菌白念珠菌中,环境pH对其形态发生有显著的影响,对胞外pH条件的应答与真菌的致病性密切相关。酵母细胞进化出一套复杂的调控机制来对环境pH变化进行应答,这个过程的调控通常需要经由Rim101转录因子调控相关基因表达的Rim101途径和其它如钙调神经磷酸酶(CaN)/Crz1信号途径的协同作用。胞内钙离子浓度的瞬间变化是细胞暴露于许多环境压力条件下的一个普遍反应,因此,本文将研究白念珠菌中是否在碱性pH压力下也遵循相同的模式以及这种钙离子的变化是否受到Rim101和Crz1的协同调控作用。使用流式细胞技术对胞内自由钙离子浓度进行监测,结果发现,3MKOH的添加使胞内钙离子浓度产生瞬间的起伏并且这种既取决于胞内钙也取决于胞外钙,但是这种变化在MID1,CCH1和YVC1基因缺失突变株中有明显的改变。通过β-半乳糖苷酶活力检测试验,发现含有不同CDRE(钙调神经磷酸酶依赖性的应答元件)的启动子对于碱性pH值的应答在相同基因中也受阻。最后,进行实时定量PCR比较了Rim101和Crz1两个转录因子对钙离子动态平衡相关基因的调控作用,数据显示,在rim101-/-和crz1-/-缺失突变株中,MID1,CCH1和YVC1三个基因在碱性pH条件下的表达都有明显的下调变化。以上结果表明,碱性pH条件能引起胞内钙离子浓度的瞬间变化且受到Rim101和Crz1的协同调控作用,证明在白念珠菌重要信号传导途径之间有潜在复杂的相互关系,有可能会开辟一条抗真菌感染的新途径。