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座壳孢菌海藻糖酶的纯化及酶学性质研究

邱君志  郭婷婷  
【摘要】:昆虫血腔中的海藻糖水解能为其生理活动提供能量,真菌产生的海藻糖酶可加速海藻糖的分解。研究虫生真菌该酶性质可为揭示其杀虫机理提供依据。采用平板透明圈法初筛和摇瓶培养复筛的方法从25株虫生真菌筛选出高产海藻糖酶的座壳孢菌株WYTM-2。应用单因素筛选法研究碳源、氮源以及维生素等对产酶量的影响,结果表明可溶性淀粉、蛋白胨、V_(B2)、pH6和K~+分别为最适合该菌产海藻多糖酶的营养因素。座壳孢最佳产酶培养基为2.5 g/L的可溶性淀粉、5g/L蛋白胨、4×10~(-4)mol/L K~+、0.05g/LV_(B2)和pH5.5;最佳产酶条件为接种量15mL、装液量50 mL/250 mL、菌龄7d和培养时间3d。在液体摇瓶发酵条件下利用优化的培养条件,座壳孢WYTM-2海藻糖酶活力达到29.38 U/mL。以最优培养基在最优条件下培养座壳孢WYTM-2获得的发酵液为材料,经硫酸铵沉淀、离子交换和凝胶层析,获得纯化的海藻糖酶;经SDS-PAGE电泳表明该纯酶蛋白的分子量约为40KDa。

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