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Caco-2细胞模型短期培养法的建立及其评价

黄晶  马美湖  
【摘要】:Caco-2细胞来源于人体结肠腺癌细胞。由于Caco-2细胞在培养条件下可自发进行上皮样分化并可形成紧密连接,其形态学、标志酶的功能表达及渗透特征与小肠类似.常用于研究药物的吸收过程。但Caco-2单层的建立需要长时间的前期准备不仅产生了大量的培养成本而且耗时较长,因此建立caco_2单层细胞细胞模型短期培养的方法很有必要。本研究集中于利用抗坏血酸建立一种短期培养人结肠腺癌细胞系单细胞层的方法。使用含抗坏血酸培养基培养Caco-2单细胞层,结果短期培养法获得的Caco-2单细胞层形态完整,TEER500Ω·cm~2;漏出标志物荧光黄表观分配系数P_(app)5×10~5cm/s,表明单细胞层的完整性良好;肠腔侧(apical,AP)AKP活性显著升高,表明单细胞层出现明显的极性分化;细胞单层上关键蛋白质(P-gp、MRP2)的mRNA表达量与标准培养法的表达量无显著差异。含抗坏血酸酸的培养基可促进Caco-2单细胞层的快速形成,利用该法建立的Caco-2细胞模型在培养至第9天时各项指标都符合要求,可用于研究口服药物转运吸收。

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