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亚油酸异构酶酵母及乳酸菌细胞壁展露表达载体的构建

刘佩  阮晖  何国庆  
【摘要】:本实验旨在构建亚油酸异构酶的酵母以及乳酸菌细胞壁展露表达载体。结果显示从植物乳杆菌(L.plantarum)lp15-2-1中扩增得到亚油酸异构酶基因(LAI),全长1695bp,编码565个氨基酸;其氨基酸序列与来源于Rhodococcus erythropolis、L.acidophilus ATCC832、L.reuteri、Bifidobacteriumbreve的亚油酸异构酶序列的同源性分别为52.71%、27.56%、26.85%、25.9%,而与来源于P.acnes的PAI及来源于Ptilota filicina的PFI序列同源性则较低,分别为11.09%和10.93%。从酿酒酵母K601中分别扩增得到信号肽MFα1以及a-凝集素基因SAG1;之后将信号肽MFα1以及α-凝集素基因SAG1连接到LAI基因的3'端和5'端后,将融合基因MFa1-LAI-SAG1连接入酵母表达载体pYES2中,成功构建了酵母细胞壁展露表达载体。从L.lactis中扩增得到Usp45信号肽序列、乳酸菌细胞壁定位蛋白M6序列,分别将信号肽USP45以及M6基因连接到LAI基因的3'端和5'端后,将融合基因USP45-LAI-M6连接入乳酸菌表达载体pMG36e中,成功构建了乳酸菌细胞壁展露表达载体。

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