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Expression of 26S proteasome in differentiation of human bone marrow stromal cells into neural-like cells

【摘要】:正Objective To investigate the process of Human Bone Marrow Stromal Cells(hBMSCs) differentiation into neural-like cells and the expression of 26S proteasome in neuronal differentiation.Methods Purified hBMSCs were treated withβ-mercaptoethanol(β-ME) for 1 day and retinoic acid(RA) for 3 days,followed by growth factor(GF;10 ng/ml bFGF, 20 ng/ml NGF) for another 3 days.Immunoflouresence was performed to detect the expression of nestin(a neural precursor cells marker),Tuj 1(a premature neuronal marker),and neurofilament(NF,a mature neuronal marker) at all stages of induced differentiation.Immunostaining and RT-PCR were used to analyze the expression of 26S proteasome during neuronal differentiation of hBMSCs.Results Quantification results showed that the untreated cells were almost never positive for nestin,Tuj 1 and NF.After treatment withβ-ME/RA,the number of nestin-positive cells(34.41±1.27)%and Tujl -positive cells(27.79±1.27)%was increased.Notably,the number of NF-positive cells was significantly increased to(56.72±2.4)% after induction with P-ME/RA/GF.Immunofluorescence analysis showed that undifferentiated hBMSCs were weakly stained by antibody against 26S proteasome,but the number of cells with high-intensity 26S proteasome was increased after treatment withβ-ME/RA and more significantly so after treatment withβ-ME/RA/GF.The RT-PCR result of 26S proteasome further comfirmed that the mRNA level of cells differentiated byβ-ME/RA(1.33),as well as by P-ME/RA/GF (1.77),was significantly increased,compared to the undifferentiated cells.Conclusion After induction with P-ME/RA/GF, hBMSCs could be differentiated into neural-like cells and express neuronal marker.Meanwhile the expression of 26S proteasome is increasing during induction,suggesting that 26S proteasome may be involved in neuronal differentiation of hBMSCs.

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