失重条件下破骨细胞研究

【摘要】：从破骨细胞起源于造血干细胞,主要功能是进行骨吸收,在骨重塑中起着重要的调节作用。破骨细胞的形成和活性异常可引起一系列骨骼疾病,因此,近年来破骨细胞已成为骨骼疾病研究的靶细胞,也是失重环境中骨丢失的发生机制研究的热点。本文综述了失重条件下破骨细胞分化和功能变化等研究进展,并用RAW264.7细胞做模型研究了破骨细胞分化的特点,为进行失重条件下骨丢失机理研究作了必要的前期准备工作。本研究所用RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞,购自中国科学院细胞库。Receptor Activator of NF-B Ligand(RANKL)购自美国PeproTech公司。387A AcidPhosphatase,Leukocyte(TRAP)Kit购自SIGMA公司。甲苯胺蓝购自国药集团化学试剂有限公司。硬组织切片机为Leica SP1600。采用10ng/ml和50ng/ml两种浓度的RANKL诱导RAW 264.7。从第2天到第9天分别取样进行TRAP染色。取第8天的样品进行HE染色。用罗丹明标记的鬼笔环肽对破骨细胞的F-actin染色,观察破骨细胞微丝的特殊形态。对RAW264.7进行了15次传代,观察细胞活力。用Leica SP1600硬组织切片机制作厚度为200μm牛股骨皮质骨骨片,进行脱脂处理,在骨片上培养破骨细胞后,用甲苯胺蓝染色,观察骨吸收陷窝。结果表明(1)通过9天的培养,发现浓度为10ng/ml的RANKL未能将RAW 264.7诱导破骨细胞,而浓度为50ng/ml的RANKL可以将RAW264.7诱导破骨细胞。与文献报道有一致性。(2)从培养细胞第2天开始即可观察到TRAP染色阳性的多核破骨细胞,第7破骨细胞数量剧增。取第8天样品HE染色,可以观察到明显的多核细胞。(3)用罗丹明标记的鬼笔环肽对破骨细胞F-actin染色,观察到破骨细胞特有的环形微丝和多核特征。(4)对RAW 264.7进行了15次传代,发现传代10次以后细胞形态出现异常,细胞融合能力下降。(5)进行脱脂处理后,在骨片上培养破骨细胞,用甲苯胺蓝染色,观察到蓝色的骨吸收陷窝。