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脑星形胶质细胞对神经元保护作用的研究

梅元武  李红戈  徐江华  
【摘要】:正目的:药物诱导星型胶质细胞(AS)激活对缺血神经元的影响,探讨丹红注射液对AS内皮素受体-B表达的影响。方法:出生48小时内的健康SD大鼠,分离大脑皮层并进行AS培养。原代细胞经纯化后纯度达到95%以上者用于实验。细胞毒性实验初筛丹红注射液对AS的安全浓度。取经3次传代培养的大鼠乳鼠AS,随机分为实验组和对照组。在各实验组中分别加入不同浓度丹红注射液,MTT比色法对AS进行药物毒性分析。根据分析结果确定本实验的安全药物浓度。流式细胞术测定细胞增殖激活情况。将AS随机分为对照组和药物组,实验组分别在细胞培养24小时、48小时、72小时后加入不同浓度丹红注射液,加入药物后继续培养24小时。流式细胞仪测细胞周期,结合增殖指数(PrI值)了解AS的增殖激活情况。荧光免疫法测定丹红注射液对内皮素受体-B表达的影响。将AS随机分为对照组和药物组,加入不同浓度药物作用24小时后固定细胞爬片,封闭并加入内皮素受体-B抗体过夜,加荧光二抗,最后PI染核。荧光显微镜下观察。测阳性细胞数和平均光密度,了解药物对内皮素受体-B表达的影响。结果:原代培养的AS分离纯化后经GFAP鉴定,纯度达到96%,可以作为实验细胞。MTT初筛丹红注射液安全浓度。根据MTT测试结果计算出细胞生长的ID50(半数存活抑制浓度)为16mg/ml。丹红注射液作用于AS的安全浓度为小于8mg/ml,在安全浓度中各实验组相比较,4mg/ml实验组抑制率最小,具有统计学意义(P0.05)。因此用于细胞增殖的药物浓度为4mg/ml。流式细胞技术测丹红注射液4 mg/ml各时间点DNA合成期(S期)细胞所占比例和增殖指数(PrI)。各时间点丹红组均能促进细胞增殖,具有统计学意义(P0.01)。药物作用48小时其DNA合成期细胞所占百分比(S%)和PI值(S+G2·M-1)×100%显著增高,提示4 mg/ml丹红注射液对AS具有增值作用,在48小时作用最明显。荧光免疫法测丹红注射液对AS内皮素受体-B的表达。药物浓度4mg/ml和5mg/ml所得荧光图片的平均光密度值明显高于其他实验组。药物浓度5mg/ml荧光图片的阳性细胞数多于其他实验组和对照组,具有统计学意义(P0.01)。结论:丹红注射液可以激活AS并使其增值,使AS内皮素受体-B表达上调。

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