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p190B RhoGAP在人非小细胞肺癌中的表达及其作用的实验研究

韩瑞钰  田馨  王娟  万晓伟  张祥宏  严霞  王俊灵  邢凌霄  
【摘要】:目的探讨p190B RhoGAP(p190-B)在人非小细胞肺癌组织中的表达情况及其作用。方法 1采用免疫组织化学染色方法,检测54例非小细胞肺癌患者肿瘤组织及其相应正常肺组织石蜡包埋切片中p190-B的表达情况,并分析其表达与临床病理特征的关系。2采用Real-time PCR和Western blot方法,检测23例人非小细胞肺癌组织及其匹配的正常肺组织中p190-B在蛋白以及mRNA(ARHGAP5)水平的表达情况。3利用siRNA干扰技术沉默p190-B的表达,以脂质体法用ARHGAP5 siRNA转染A549细胞,分别采用Real-time PCR和Westernblot方法检测ARHGAP5 siRNA的干扰效率。并进一步采用MTT法、克隆形成实验观察ARHGAP5 siRNA对A549细胞增殖活性的影响。采用Boyden小室实验以及划痕实验,评价ARHGAP5 siRNA对A549细胞迁移和运动能力的影响。结果 1p190-B在人原发非小细胞肺癌组织中的表达情况:免疫组化结果表明,54例肺癌组织中p190-B的表达明显高于其相应的正常肺组织(P=0.000)。进一步结合临床病理参数进行分析,发现p190-B在腺癌中的表达明显高于其在鳞癌中的表达(P0.05)。p190-B表达与患者的淋巴结转移(r=0.704,P=0.000)以及临床TNM分期(r=0.713,P=0.000)呈正相关。Western bolt检测结果表明,p190-B蛋白在肺癌组织中的表达明显高于其匹配的正常肺组织。Real-time PCR检测结果表明,65.2%(15/23)的病例其肿瘤组织中ARHGAP5 mRNA(编码p190-B蛋白)的表达显著高于其匹配的正常肺组织。2利用siRNA干扰技术,探讨p190-B在肺癌中的作用。与NC siRNA转染对照组相比,ARHGAP5 siRNA转染组细胞中p190-B的表达明显抑制。在此基础上,进一步从细胞增殖、侵袭以及迁移方面观察p190-B在肺癌中的作用。MTT以及克隆形成实验结果提示,ARHGAP5 siRNA转染可抑制A549细胞的增殖能力。细胞划痕实验以及Transwell方法均表明ARHGAP5siRNA1可降低A549细胞的迁移能力,其在细胞中的高表达可以促进肺癌肿瘤细胞的迁移和运动能力。结论人原发非小细胞肺癌组织中,p190-B的表达明显高于相应的正常肺组织中,尤其在腺癌组织中其表达更为显著。p190-B蛋白的表达与淋巴结转移及患者临床TNM分期呈正相关。结合体外实验表明,p190-B在非小细胞肺癌发生以及侵袭与转移过程中发挥重要作用。

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