【摘要】：目的:血管生成在肿瘤的恶性增殖以及侵袭转移过程中发挥着重要的作用,而且肿瘤血管密度对患者的生存期和生存质量有重要的影响。肿瘤持续的恶性增殖需要新生血管不断提供的营养,同时肿瘤也可通过血管在远隔部位产生转移灶。因此肿瘤血管生成机制受到了广泛的关注。GADD45α是P53重要的下游蛋白,参与细胞周期与凋亡的调控和DNA损伤修复,本实验室前期发现GADD45α可通过增强β-Cateinin膜定位,调节细胞接触性抑制和同型细胞粘附,从而发挥抑制肿瘤转移的作用。本试验旨在研究GADD45α在肿瘤血管生成中的调节作用。方法:1、收集MEFGADD45α+/+、MEFGADD45α-/-细胞以及SiRNA敲降GADD45α前后Hela细胞的总RNA,用Real-timePCR检测VEGF表达量。2、收集MEFGADD45α+/+、MEFGADD45α-/-细胞培养上清(培养48h)和敲降GADD45α前后Hela细胞培养上清(敲降后培养48h)作为条件培养基,用TubeFormation(成管实验)和transwell实验,观察条件培养基对HUVEC(人脐静脉内皮细胞)成管和迁移能力的影响。3、用MEFGADD45α+/+、MEFGADD45α-/-细胞进行裸鼠移植瘤实验,观察成瘤速度和体积的差异。收集移植瘤,固定后用VWF抗体进行免疫组化染色,统计瘤内血管密度差异。结果:1、Real-timePCR检测结果显示MEFGADD45α-/-细胞VEGF表达量是MEFGADD45α+/+的2.5倍(p0.01),敲降GADD45α的Hela细胞VEGF表达量是未敲降细胞的2倍(p0.01)。2、MEFGADD45α-/-细胞条件培养基对HUVEC的成管和迁移能力有显著的促进作用,并明显强于MEFGADD45α+/+细胞条件培养基(p0.01)。同时敲降GADD45α可显著增强Hela细胞条件培养基在体外促进血管生成的能力(p0.01)。3、移植瘤实验中,MEFGADD45α-/-细胞移植瘤的生长速度、体积、重量和瘤内血管密度均显著高于MEFGADD45α+/+(p0.01)。结论:缺失GADD45α可促进肿瘤血管生成,此过程可通过对VEGF表达的调控来实现。该结果进一步显示了GADD45α对肿瘤发生发展过程具有重要调节作用,其在肿瘤中表达的检测对临床治疗和患者生存期的预测具有一定的指导意义。