三氧化二砷对HPV感染阳性的宫颈癌的治疗研究

【摘要】：目的:用三氧化二砷治疗急性早幼粒白血病(APL) 疗效显著。研究表明三氧化二砷还可以诱导多种实体瘤细胞生长阻滞和凋亡。本实验室前期研究发现,三氧化二砷可以降低宫颈癌细胞中主要致病原因人乳头瘤病毒(HPV)E6／ E7的表达。通过三氧化二砷作用于宫颈癌细胞系,探讨其诱导宫颈癌细胞凋亡的作用和分子水平的作用机理,通过腹腔注射三氧化二砷于宫颈癌模型小鼠,检测其体内抗肿瘤效应。方法:不同浓度三氧化二砷作用于宫颈癌细胞系H e L a (HPV18+)、Siha和Caski(HPV16+),于不同时间点, MTT法检测细胞生存情况,RT—PCR法检测HPV E6／E7 转录水平的改变情况,Western Blot法检测线粒体相关蛋白、凋亡相关蛋白、信号通路蛋白表达水平的改变情况,用TC-1 细胞系皮下注射C57BL／6小鼠作为宫颈癌模型小鼠,腹腔注射不同浓度三氧化二砷溶液于宫颈癌模型小鼠,检测其体内抑制肿瘤效应。结果:三氧化二砷诱导宫颈癌细胞凋亡的机制为:(1)线粒体是对三氧化二砷作用最敏感的细胞器,三氧化二砷直接与线粒体蛋白结合,使线粒体外膜开放,抑制 Bcl-2参与的三氧化二砷诱导线粒体途径凋亡的负性调控, caspase 9、3激活,Bax形成同源多聚体,导致细胞凋亡, (2)三氧化二砷直接与微管蛋白结合,稳定微管聚合,抑制其功能,导致细胞分裂阻滞,最终细胞发生凋亡,(3)三氧化二砷对于蛋白的巯基(-SH)有高亲合性,以一些对氧化还原敏感的酶(蛋白酪氯酸磷酸酶PTPases、JNK)为作用靶点, 改变和影响酶的活性,激活MAPK信号通路,(4)三氧化二砷下调HPV E6／E7,解除其对p53及pRb的抑制。三氧化二砷的体内抑制肿瘤效应为:腹腔注射三氧化二砷2mg／ kg×20day,5mg／kg×20day对宫颈癌模型小鼠的抑瘤率分别为63．98％,78．26％。结论:三氧化二砷主要通过线粒体途径诱导宫颈癌细胞系凋亡,腹腔注射三氧化二砷,在体内有明显的抑制宫颈癌肿瘤效应,副作用不明显。以上结果为三氧化二砷临床用于治疗宫颈癌提供依据。