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缺氧对肝细胞癌乙酰肝素酶表达的的影响

王顺祥  吴晓慧  高峰  宋西进  李建坤  彭利  唐瑞峰  张萌  肖燕  张风瑞  
【摘要】:目的:乙酰肝素酶是一种葡萄糖醛酸内切酶,也是目前发现的唯一可以降解硫酸乙酰肝素活性的酶,它通过切断硫酸乙酰肝素蛋白多糖侧链降解细胞外基质和血管基底膜, 并且能释放和活化硫酸乙酰肝素蛋白多糖结合型的生长因子诱导血管生成,从而促进肿瘤细胞的侵袭和转移。目前乙酰肝素酶表达的调控机制不清。研究表明HPA在大部分易侵袭转移的缺氧恶性肿瘤中高表达、高活性状态,且仅在酸性环境中发挥作用,而缺氧状态又造就了酸性环境,这提示我们缺氧可能参与了肿瘤细胞中HPA基因表达及其活性的调控。本研究探讨肝细胞癌中HPA和HIF—1 α表达的相关性以及缺氧对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞HPA表达的影响。方法:免疫组织化学方法检测肝细胞癌标本中HPA和HIF-1 α的表达,常氧和缺氧培养肝细胞癌细胞株SMMC-7721,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,检测常氧培养和缺氧培养后SMMC-7721细胞Hpa mRNA表达的变化, 以β-actin作为内参照标准,对扩增产物通过凝胶扫描仪进行DNA电冰条带的密度值分析,将Hpa与β-actin比值作为Hpa表达水平的参数,对Hpa产物相对定量,以Western blot方法检测SMMC-7721细胞Hpa蛋白表达的变化,并进行相对定量分析。结果:HPA蛋白在肝癌组织中的阳性表达率(92%)显著高于癌旁(71.4%)及正常肝组织(8.3%)(P0.05), HIF-1 α蛋白在肝癌组织中阳性表达率(88%)显著高于癌旁 (60.71%)及正常肝组织(8.33%)(P0.05),肝癌组织中HPA和 HIF-1 α的表达呈显著正相关(r=0.295,P=0.038),经缺氧培养20小时后,SMMC-7721细胞HPA mRNA表达量为6. 234±0.457,常氧培养组HPA mRNA表达量为2.910±0. 137,缺氧培养组细胞HPA mRNA表达量显著高于常氧培养组(P0.05),缺氧培养后SMMC-7721细胞HPA蛋白表达量 (65KD为1.437±0.067,50KD为1.706±0.066)显著高于常氧培养组HPA蛋白表达量(65KD为1.192±0.060.50KD为 1.580±0.265)(P0.05)。结论:缺氧可以通过促进HIF—1 α的表达,从而上调HPA的表达。

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