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Smad4基因抑制人类胃癌细胞株生长作用的实验研究

程时丹  王晓瑾  乔敏敏  周季兰  吴云林  
【摘要】:目的:研究Smad4基因对人类胃癌细胞株细胞周期和细胞凋亡的影响以探讨其对人类胃癌细胞生长抑制的作用机制,从而为进一步探讨Smad4用于基因治疗可能性提供实验依据。方法:构建Smad4真核表达载体pcDNA3.1(-)- Smad4质粒,并用脂质体介导转染方法将pcDNA3.1(-)- Smad4质粒和空载质粒cDNA3.1(-)导入培养的Smad4基因表达缺失的胃癌MKN28细胞株中,经G418筛选,获得稳定表达Smad4基因的Smad4+-MKN28细胞和作为对照的 Smad4--MKN28细胞。体外培养亲本细胞、Smad4+- MKN28细胞和Smad4--MKN28细胞,各组细胞于第1、3、 5、7天取3瓶细胞计数,计算平均值,并绘制生长曲线,三组细胞培养48小时后应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率的改变,用RT-PCR和Western blot方法检测三组细胞bcl- 2、bax基因的mRNA和蛋白的表达。统计分析:应用SAS6. 12软件包进行协方差分析和团体t分析。结果:稳定转染 pcDNA3.1(-)-Smad4重组质粒的Smad4+-MKN28细胞较生长速度减慢(p0.05),流式细胞仪检测结果示Smad4+- MKN28细胞G0-G1期细胞百分数增加(p0.05),S期细胞百分数减少(p0.05),细胞凋亡增加(p0.05),RT-PCR 结果示Smad4+-MKN28细胞bax基因表达增加(p0.05), bcl-2基因表达减少(p0.05),Western blot结果示2者的编码蛋白也出现相应的变化。结论:恢复Smad4表达后细胞增殖减慢,凋亡增加,促凋亡基因表达上调,抑制凋亡基因表达下调,二者比值增大,从而使肿瘤细胞的生长受到抑制。

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