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肝细胞生长因子基因转染对胃癌MKN-45细胞凋亡抑制作用的研究

沈建国  王林波  
【摘要】:目的:研究肝细胞生长因子(Hepatocyte Growth Factor,HGF)在阿霉素诱导的胃癌MKN-45细胞凋亡中的影响,以探讨HGF在诱导胃癌化疗耐药中的作用。方法: PU C-SR α-HGF、pIRES2-EGFP荧光载体分别用Bam HI酶切后回收目的片段,T4 DNA连接酶连接HGF cDNA 及pIRES2-EGFP Bam HI片段,重组质粒分别用Bam HI、 Pst I和Kpn I酶切鉴定HGF基因真核表达荧光载体。HGF 重组载体及空质粒载体分别用lipofectamine 2000脂质体转染胃癌MKN-45细胞株,G418筛选转染MKN-45细胞,运用 RT-PCR及Western blot方法检测HGF的表达情况,建立稳定表达HGF基因的转染细胞株并鉴定HGF的功能。分别用不同浓度的阿霉素处理HGF重组质粒转染、空质粒转染及未转染MKN-45细胞,MTT法测定阿霉素对三组细胞的抑制作用,DNA凋亡条带法、DAPI染色细胞凋亡计数法及流式细胞仪PI染色法检测三组细胞之间细胞凋亡发生的差异。实验数据采用SPSS 10.0统计软件进行分析,组间比较采用单因素方差分析。结果:PUC—SR α—HGF cDNA片段约为2.3kb,HGF cDNA Bam HI片段(2.5kb)与pIRES2- EGFP(5.3kb)连接反应后重组质粒pIRES2-EGFP-HGF分别用Pst I和Kpn I酶切后产生的片段大小证实HGF插入方向均正确。HGF转染MKN-45细胞用RT—PCR方法可检测到 HGF mRNA的表达,同时在其细胞培养液中可检测到HGF 蛋白。用HGF转染细胞的培养液培养MDCK细胞后,发现 MDCK细胞与细胞之间连接消失,细胞呈离散性生长。分别用不同浓度阿霉素处理HGF重组质粒转染、空质粒转染及未转染胃癌细胞后,MTT结果发现HGF重组质粒转染细胞可显著降低阿霉素诱导的细胞抑制作用,0.1ug/ml阿霉素作用细胞48小时后DNA凋亡条带分析发现,空质粒转染及未转染MKN-45细胞出现典型的180~200bp阶梯状凋亡条带, 而HGF重组质粒转染细胞未见凋亡条带。0.05ug/ml阿霉素作用细胞后DAPI染色凋亡细胞计数结果发现HGF重组质粒转染细胞的凋亡发生率为11.4±1.6%,而空质粒转染和未转染细胞分别为29.1±2.9%和28.9±3.6%,差异具有显著性 (p0.01)。流式细胞仪PI染色结果同样发现阿霉素对HGF重组质粒转染细胞的诱导细胞凋亡率明显较空质粒转染和未转染细胞低,差异具有统计学意义。结论:肝细胞生长因子基因转染的胃癌MKN-45细胞分泌的HGF具有正常的生理功能, 可用于HGF对肿瘤细胞生物学效应的研究。阿霉素对HGF 重组质粒转染细胞诱导的细胞凋亡作用较空质粒转染和未转染细胞小,说明HGF可显著抑制阿霉素诱导的胃癌细胞凋亡,也进一步提示HGF发挥的细胞抗凋亡效应可能是引起胃癌细胞化疗耐药的一个重要机制。

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9 衣晓峰;维生素E琥珀酸酯可抑制肿瘤细胞生长[N];中国医药报;2010年
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