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线粒体DNA异常在喉癌发病机制中的作用研究

黄志刚  许洪波  房居高  陈学军  陈晓红  高晗  
【摘要】:目的:喉癌是耳鼻咽喉-头颈外科常见的恶性肿瘤,大多数喉癌是从正常粘膜上皮→轻、中、重度不典型增生、原位癌→浸润癌逐步发展形成的。临床各期病变均较多见,这为研究肿瘤发病机制提供了良好模型。目前头颈肿瘤发病机制主要是从核基因组异常的角度出发来进行阐述的, 即各发展阶段基因缺失所导致的癌基因的激活或抑癌基因的失活,.然而近来线粒体DNA以其在肿瘤中的高突变率逐渐引起学者们的关注。本研究旨在探讨线粒体DNA拷贝数异常在喉癌发病机制中的作用。方法:选取2000年4月~2004 年12月就诊于北京同仁医院的喉鳞状细胞癌患者32例,所有患者术前均未接受过放疗和(或)化疗,年龄37~79岁,平均年龄58.09±10.43岁。男30例,女2例。其中I期3例、Ⅱ期8例、Ⅲ期11例、Ⅳ期10例[按UICC(1997年)TNM分类标准。其中高分化12例,中分化13例,低分化7例。取术中新鲜癌组织和癌周组织,显微切割获取高纯度的癌或癌周组织细胞。分别提取总DNA(包括核DNA和线粒体DNA)。以线粒体DNA的NDI和核DNA的β-actin为目的基因。进行 SYBR Green I荧光定量PER扩增。获取相应的Ct值后与同期所作的标准曲线进行比对,算出相应的DNA浓度,以β-actin/ND1 DNA用作比较mtDNA相对拷贝数,并对不同TNM分期和分化程度喉鳞状细胞癌的mtDNA拷贝数进行比较分析。结果:喉鳞状细胞癌(I和Ⅱ期)癌周、癌组织平均(β-actin/NDI DNA)比分别为0.269和0.274,(Ⅲ和Ⅳ期)癌周、癌组织平均(β-actin/ND1 DNA)比为0. 168和0.157。癌周组织低、中、高分化的平均(β-actin/ ND1 DNA)比分别为0.184、0.237、0.239;癌组织分别为 0.175、0.201、0.226。结论:喉鳞状细胞癌(Ⅲ和Ⅳ期)癌组织的线粒体DNA拷贝数显著高于I和Ⅱ期,喉鳞状细胞癌 (I和Ⅱ期)癌组织的线粒体DNA拷贝数显著高于癌周组织, Ⅲ、Ⅳ期癌组织的线粒体DNA拷贝数与癌周组织无显著性差异。中、低分化的喉鳞状细胞癌癌组织线粒体DNA拷贝数显著高于癌周组织,高分化两者无显著性差异。线粒体DNA 拷贝数的变化在肿瘤的发病机制中可能是一个早期事件。

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