放线菌素D影响B23的磷酸化并抑制HepG2细胞生长

【摘要】：目的:B23(Nucleophosmin,NPM,numatrin, NO38)是一种多功能的核仁磷酸化蛋白,它参与RNA合成和染色体构建等,在细胞生长和增殖中发挥重要的作用。放线菌素D,又名更生霉素,能抑制RNA的合成,作用于 mRNA,干扰细胞的转录过程,阻止蛋白质的合成,是一种经典的抗癌药物,它可引起B23蛋白在细胞内的穿梭,并抑制细胞生长,但其机制至今尚不清楚。本研究旨在探讨放线菌素D作用下HepG2细胞中B23蛋白磷酸化的改变,以及这种改变与细胞生长抑制和B23蛋白核仁穿梭之间可能存在的相互关系。方法:HepG2细胞体外培养并用低浓度的放线菌素D处理,(不同时间段0h,加药24h,加药48h,撤药24h, 撤药4811),分别应用流武细胞仪,免疫印迹,免疫沉淀,免疫荧光,双向电泳等实验方法及磷酸化抗体检测HepG2生长周期变化、B23蛋白表达水平的改变、B23磷酸化及定位的变化。结果:在放线菌素D作用下,HepG2细胞出现生长抑制,细胞周期阻滞于G2期,撤药后短期内细胞生长恢复。放线菌素D作用下B23蛋白表达水平没有明显改变,但B23蛋白出现定位变化,即从核仁移位到核浆,当撤药后,B23又从核浆回到核仁上,进一步研究发现B23蛋白在药物作用下发生等电点及磷酸化水平的改变,而撤药后B23蛋白的这些改变又恢复。结论:低浓度放线菌素D作用于HepG2细胞导致可逆的生长阻滞,引起可逆性的B23蛋白磷酸化状态及其穿梭移位改变。提示可能由于B23磷酸化的改变,导致细胞生长抑制。B23穿梭模型可在细胞生物学研究中发挥重要作用。