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定量PCR及其质量控制体系的建立

陈高明  李春海  孙丽亚  
【摘要】:本文根据共扩增 PCR 定量原理,建立了一种能简单,快速, 批量检测临床样本中耐药相关基因,如 GST-πmRNA 表达的方法。为了方便研究 GST-π和 MDR1的关系,又建立了 GST-π和 MDR1共表达定量 PCR 技术。扩增条带光密度值用底片扫描或用凝胶成像系统检测,基因相对表达水平用目的基因和β-actin 比值不受肝素及 SDS 等因素的影响。批量检测临床样本需要稳定可重复的系统,本文还建立了一套质量控制的方法,用上下控制线定值的 X 控制图来控制定量 PCR 结果。此法能较好地控制定量 PCR 的扩增和电泳质量,灵敏地反映偶然误差和系统误差。质控的设定可保证定量 PCR 能检测出小于2倍的表达差异。

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