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用EBV转化的大肠癌患者B细胞构建噬菌体抗体库

朱建高  李跃辉  胡锦跃  李官成  周国华  李小玲  孙去病  
【摘要】:目的:构建全人源化的噬菌体抗体库。方法:采用 EBV 转化技术,ELISA 技术,PCR 技术,噬菌体表面呈现技术。结果:EBV 转化8例大肠癌患者 PBMC,其中七例有抗大肠癌抗体产生,多次 PCR 扩增出5种 VH(γ,μ)和9种 VL(κ,λ)基因,经简并组合成15种 scFv 基因。在体外与表达载体 fUSE5连接,电导入大肠杆菌 MC1061,经四环素抗性筛选,得到库容为1.1×107的初级噬菌体抗体库。结论:应用 EBV 转化技术联合噬菌体抗体库技术,制备全人源化的抗肿瘤单链抗体(ScFv),这一策略是完全可行的。

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