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9p21-22区域鼻咽癌候选抑瘤基因的克隆及其功能的初步研究

阳剑波  宾亮华  李忠花  张小慧  李江  钱骏  张必成  周鸣  谢奕  李桂源  
【摘要】:染色体9p21-22区域高频率的等位基因杂合性丢失(Loss of Heterozygosity,LOH)是肺癌、乳腺癌、膀胱癌和鼻咽癌等多种肿瘤中的常见事件。David Sidransky 等检测了大量原发性非浸润型和浸润型头颈部鳞状细胞肿瘤(HNSCC)中常见的10个染色体缺失部位(3p、5q、8p、 9p、11q、18q 和21q 等)。发现9p21-22区域的 LOH 频率最高,并认为 9p21-22区域的缺失可能是头颈部肿瘤发生的始动因素之一。定位于 9p21区域的 p16基因认为是该区域内抑瘤基因的主要候选者,但在不少肿瘤中其缺失和突变频率并不高,故不少学者认为9p21-22区域可能还存在多个与肿瘤发生密切相关的抑瘤基因。最近本室应用14个高度多态性的微卫星位点构建了25例低分化鼻咽癌患者9p21-22区域的精细缺失图谱(平均距离约1.8cM),确定了一个较小共同缺失区,为距 p16基因着丝粒端约14.0cM 处的 D9S161- D9S1853间(2.7cM),其 LOH 频率为35%。在此基础上采用定位-候选克隆策略,用 RT-PCR 和 Northern 杂交方法检测了上述共同缺失区内代表35个新基因的 ESTs 在鼻咽癌组织中的表达状况,筛选出一个在鼻咽癌细胞株 HNE1中无表达和部分鼻咽癌活检组织(73%,11/15) 中表达下调的 EST(dbEST:208825)。通过 ESTs 拼接、RACE 扩增等技术已获得含该 FST 的2.4 kb 的全长 cDNA(GenBank:R149297),其中含 1017个核苷酸的完整阅读框架,计算机查询为未知新基因,命名为 NAG6,多组织膜 Northern Blot 结果显示其仅在人脑和心组织中表达,提示该基因可能是一个相对的组织特异性基因。构建其真核细胞表达质粒(pcDNA3.1-NAC6)转入 HNE1中,观察细胞生长曲线、软琼脂集落形成,发现其能明显抑制鼻咽癌细胞的生长,因此该基因可能是 9p21-22区域内一个新的与鼻咽癌相关的抑瘤基因候选者。

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