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维甲酸联合音猥因子诱导人脐带间充质干细胞向运动神经元分化的实验研究

刘学元  李德华  单伟  
【摘要】:维甲酸(RA)和音猥因子(Shh)是神经生长发育过程中的重要因子,在运动神经元的形成中有不可或缺的作用。本实验采用第3代人脐带间充质干细胞(hUCMSCs),实验分为4组:A组不加任何诱导剂;B组加入0.5μg/mL RA;C组,加入300 ng/mL Shh;D组,加入0.5μg/mLRA和300 ng/mLShh。细胞诱导后25 d,观察细胞形态变化;免疫细胞化学方法检测Nestin、MAP-2、Hb9和GFAP的表达,比较各组细胞阳性表达率。Western-Blot法检测D组细胞诱导后第5、10、15、20、25 d Nestin、MAP-2、Hb9的表达;ELISA检测D组细胞诱导后第10、15、20、25、30 d细胞内Ach的含量。结果显示,诱导第25天后,A组和C组细胞诱导后形态变化不明显,Nestin和MAP-2阳性表达率均很低,两者间无差异。B组和D组细胞具有典型的神经元样形态;Nestin和MAP-2阳性表达率比其他两组高,有显著性差异。4组中只有D组细胞诱导后Hb9表达阳性,其他各组均无Hb9表达。实验各组GFAP表达阳性率均较低,无差异。Western blot检测结果显示,D组细胞从第5天起,可见Nestin的表达;第10天可见较多Nestin表达,少量MAP-2表达;第15天Nestin表达下降,MAP-2表达增多,Hb9开始出现;第20天MAP-2和Hb9较多表达;第25天与第20天变化不大。ELISA检测结果显示,从第15天起,D组可检测到少量Ach,其含量随着诱导时间的延长也在增加,到第30天到达高峰。RA能促进hUCMSCs向神经细胞分化,单独使用Shh并没有明显效果,而RA联合Shh能显著促进hUCMSCs向运动神经元分化。

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