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基于树突状细胞的肿瘤疫苗构建及其抗肿瘤效应研究

陈帅  李浩博  李牧  李双  赵培林  
【摘要】:本研究构建携带模拟肿瘤抗原的慢病毒载体pHR-CMV-EGFP-OVA;从小鼠骨髓中分离提取树突状细胞,并经流式细胞仪分选,以适宜条件培养扩增;脂质体法转染人胚肾293T细胞包装慢病毒,用包装产生的慢病毒感染DC与LLC细胞,以有限稀释法筛选出能够稳定表达OVA的单克隆细胞;尼龙毛法分离提取T细胞;三细胞联合培养,应用MTT法、流式细胞仪、免疫细胞化学等方法,测定LLC细胞经DC刺激的T细胞作用后,细胞增殖抑制效应、凋亡率和细胞周期的变化。结果显示:电泳和DNA测序结果显示pHRCMV-EGFP-OVA构建正确;LLC-OVA肺癌细胞在mRNA和蛋白水平稳定表达OVA;三细胞培养显示出明显的LLC-OVA细胞抑制、杀伤效应。结果表明,经肿瘤抗原基因修饰的DC能特异性激活T细胞,进而通过不同途径有效地杀伤肿瘤细胞。

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