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L-NAT对PHN细胞缺血/缺氧损伤的保护作用及其机制研究

于树娜  史才兴  赵世福  赵金岭  蒋吉英  
【摘要】:为探讨N-乙酰-L-色氨酸(L-NAT)对PHN细胞缺血/缺氧损伤的保护作用,本研究用H_2O_2诱导PHN制备海马神经元氧化应激损伤的细胞模型,观察活化型Caspase-3的表达,细胞存活率、线粒体跨膜势能及凋亡诱导因子(AIF)和细胞色素C(Cytc)等促凋亡因子的改变。(1)镜下观察:与对照组相比,H_2O_2诱导后,神经元细胞膜变圆,胞体肿胀,细胞失去原有形态,突起减少或消失;与H_2O_2组相比,L-NAT组神经元的胞体较完整,大部分细胞存在少量的突起,突起的数量较正常组减少。(2)台盼蓝染色显示,对照组可见少量的台盼蓝阳性细胞,H_2O_2诱导后,出现大量的阳性细胞,L-NAT干预后,阳性细胞的数量降低,L-NAT组细胞的存活率明显高于H_2O_2组。(3)免疫荧光染色和免疫印迹结果显示,激活的Caspase-3在H_2O_2组的表达较L-NAT组高。(4)Rh123染色显示线粒体膜势能(△Ψm)的改变,对照组阳性产物呈点状或颗粒状分布于胞浆中,H_2O_2组阳性反应减弱,阳性产物呈弥散性分布;L-NAT可使部分细胞恢复颗粒状分布的特点。(5)Western blot结果显示,Cytc和AIF在对照组组线粒体中的表达较高;在H_2O_2组由于其向胞浆的释放,使其在线粒体中的量降低,而在胞浆中的表达增高;L-NAT可减轻这一改变。上述结果表明,L-NAT可抑制线粒体膜势能的丧失、通过抑制Caspase依赖性和非依赖性的细胞凋亡途径,对缺血再灌注损伤的神经细胞产生保护作用。

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