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奶粉中黄曲霉毒素M_1的免疫亲和净化-液相色谱-串联质谱法研究

谢洁  江游  黄泽建  龚晓云  戴新华  熊行创  江海洋  方向  
【摘要】:食品中真菌毒素严重威胁人类健康,其检测技术研究一直是分析化学领域研究的热点[1],在我们已有的研究基础上[2],研究建立了免疫亲和净化(IAC)-液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定奶粉中黄曲霉毒素M_1(AFM_1)的方法。以CNBr-Sepharose 4B为载体,偶联AFM_1-mAb,偶联率大于95%,对AFM_1最大吸附量为135 ng/mLgel。奶粉样品用50°C纯水溶解后,离心去脂,取下层液体调节pH至6.5左右,过AFM_1-IAC,去离子水洗涤,纯甲醇洗脱,目标物经BEH C18 column(50 mm×2.1 mm, 1.7μm)分离,ESI正离子MRM监测模式测定(图1)。AFM_1的检测限(LOD)和定量限(LOQ)分为0.003和0.010μg/kg,雀巢全脂奶粉、伊利脱脂高钙奶粉、多美滋婴幼儿配方奶粉的添加回收率在71.8%–88.9%之间,相对标准偏差小于6.2%。本文采用CNBr-Sepharose 4B为载体,这是一种珠状琼脂糖,具有疏松的网状立体结构,可使大分子物质自由扩散,它表面积大和网孔结构的特点有利于增大容量,具有化学惰性,性质稳定,且易于偶联,方法成熟,偶联成功率高等特点[3]。也有文献报道,用氨基硅粒子[4]、二醇硅粒子[5]、分子印迹聚合物[6]等材料作为IAC的载体基质,未来对新型载体基质的探索研究,将是免疫亲和色谱技术发展的趋势。另外,实验优化了溶液pH、洗脱液类型等条件,发现上柱溶液的pH对回收率影响较大,所以,上柱前需要调节pH至AFM_1-mAb的最佳耐受值。综上所述,本方法适用于奶粉中痕量或超痕量AFM_1的精确定性定量分析,满足进出口商品的日常检测需求。

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