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寡糖链非还原端单糖种类测定初探

姜文月  郭怀忠  张小倩  
【摘要】:活性多糖或寡糖通过作用于巨噬细胞(Mφ)膜上的MR受体,使其释放某些前炎症因子或细胞因子,对机体产生免疫调节作用。目前,多糖或寡糖免疫活性的筛选主要是通过活体动物及细胞药理学实验进行,操作复杂、成本高、周期长。基于MR受体能特异性地识别端基为甘露糖、岩藻糖及N-乙酰葡萄糖胺的糖链,我们尝试建立一种基于常规仪器分析的寡糖初筛方法,从寡糖端基单糖组成入手,建立了一种端基单糖种类测定方法,快速对具有免疫调节活性的糖类物质进行筛选,根据降解后端基单糖(非还原端)与其它位置单糖甲基化程度的差异,识别非还原端基单糖。利用单糖制备部分甲基化的单糖对照品,用于寡糖非还原端基单糖种类的确定。首先将寡糖全甲基化:以DMSO为溶剂,在碱性条件下采用CH3I实现寡糖的全甲基化(通过测定其红外光谱确定甲基化程度),然后将其水解;对甘露糖、半乳糖等单糖采用同样方法进行全甲基化,然后加入2 mol/L TFA溶液适量,水浴加热2 h以水解C-1位的甲基,得到"端基甲基化单糖对照品";最后,对上述各样品进行PMP衍生,毛细管区带电泳进行分离,通过对照或加样,鉴定寡糖非还原端单糖种类。优化后的电泳条件为:未涂层熔融石英毛细管柱(114 cm×50μm,有效长度105 cm);背景缓冲液为35 mmol/L硼砂溶液(p H10.0);检测波长245 nm;电压25 kV;柱温为室温。由于还原端单糖C-1位羟基被甲基化,不能开环形成醛基,故不能被PMP衍生化和检测。利用已知结构的寡糖乳糖,通过本方法,可明确判断其非还原端单糖为半乳糖,验证了所建立的端基单糖测定方法的可行性。但发现半乳糖甲基化后衍生进行毛细管测定结果为双峰,初步排除了甲基化不完全的原因,有关问题尚需进一步探讨。

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