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毛细管电泳-化学发光法用于分析苦参有效成分苦参碱

孙林  甘婷婷  陈华  夏之宁  
【摘要】:毛细管电泳(Capillary Electrophoresis,CE)用于中药有效成分分析时具有高效、快速、成本低、样品预处理简单的优点,但由于进样少、光程短,使传统光度检测法灵敏度变差,限制了毛细管电泳的广泛应用。而化学发光(Chemiluminescence, CL)具有不需外加光源,背景噪音低,检测灵敏度高的优点,但其选择性差。将化学发光与毛细管电泳联用可解决灵敏度低和选择性差的问题,同时发挥两者的优势, 用于中药有效成分的分离分析。本文采用毛细管电泳-化学发光联用模式,根据苦参碱对 Luminol-H_2O_2-NaClO 发光体系有明显抑制作用的原理,对中药苦参中有效成分苦参碱实现了在线分离与检测。对影响毛细管电泳分离和化学发光检测的条件进行考察,确定最优电泳条件为:运行缓冲液:5 mmol/L luminal-10 mmol/L H_2O_2-50 mmol/L 硼酸盐(pH 8.4),运行电压10.0 kV,电迁进样5 s,进样电压10.0 kV。实验选用柱后套管式三通接口,Na- ClO 溶液(10 mmol/L,50 mmol/L 硼酸盐配制,pH 8.4)由限流毛细管在重力作用下引入,高度差10 cm。精密称取适量标准品,用缓冲液溶解后,依次稀释成质量浓度为2.0、1.0、0.5、 0.25、0.1、0.05、0.025 mg/mL 的溶液,进样分析。以苦参碱的峰面积对浓度作图, 在质量浓度范围0.025~2.0 mg/mL 之间具有良好的线性关系,峰面积对浓度作图的线性关系为 Y=273989C-16258,R~2=0.9939(n=7),其中 C 浓度(mg/mL),Y 峰面积(μV)。测定中药苦参中苦参碱对发光抑制的强度,带入标准曲线,通过计算得到苦参中苦参碱的含量为2.06 mg/g。本文建立的毛细管电泳-化学发光联用的方法简单、快速,可用于中药有效成分的分析检测,从而有望为中药质量控制提供一种新的手段。

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