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产油微藻O.multisporus的分子生物学鉴定

杨勋  刘平怀  时杰  郝宗娣  张森  
【摘要】:从海南淡水水体分离得到一株富油微藻,通过形态观察及分子生物学鉴定其为Ourococcus multisporus。微藻DNA提取采用生工SK1375真菌基因组DNA抽提试剂盒,所提DNA于-4℃冰箱保存备用。DNA扩增采用真核生物18S rDNA扩增通用引物18SF(5′-CCTGGTTGATC CTGC CAG-3′)和18SR(5′-TTGATCCTTCTGCAGGTTCA-3′)。PCR反应条件为98℃预变性5min,然后95℃35 S,55℃35 S,72℃40 S,35个循环后于72℃延伸8min。PCR产物经电泳后采用生工SK1131胶回收试剂盒回收,将目标片段连接到PUCm-T载体上克隆,选择阳性载体测序。获得测序结果后,用BLAST软件对基因序列的同源性进行分析,从数据库下载相似的18S rDNA部分序列,用ClustalX软件对所测序列与下载序列进行多序列对齐排列,用MEGA5.0软件采用neighbor-joining算法构建进化树。

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