抗大田软海绵酸单克隆抗体的制备及免疫学特性分析

【摘要】：目的:制备了赤潮毒素大田软海绵酸(okadaic acid,OA)单克隆抗体,并分析其免疫学特性。方法:用小分子物质赤潮毒素大田软海绵酸((okadaic acid,OA)和半抗原小牛血清蛋白偶联,合成完全抗原OA-BSA;用该抗原免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备产生抗OA的单克隆抗体杂交瘤细胞,小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞以5:1混合,融合剂为50%的PEG6000。采用间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,并用有限稀释法进行亚克隆化。经过三次亚克隆后得到一株可稳定分泌抗OA单克隆抗体的杂交瘤细胞株3H4,取细胞生长状态良好的克隆细胞进行建株液氮保存。取12周龄的BIAB/c雌性小鼠腹腔接种用对数生长期的杂交瘤细胞,1×106个细胞/鼠,采集腹水,离心纯化生产单抗,并对抗体效价、亚型、特异性、敏感性进行免疫学鉴定与分析。鉴定结果:抗体亚型为IgG2b;腹水效价为1:1.28×106;50%抑制浓度为2.852ng/ml;最低检测限:0.45 ng/ml;电泳结果显示抗体由一条重链和一条轻链组成;与OA同系物PTX1、GYM、SPT1、YTX交叉反应率为0。结论:制备的OA单抗效价和特异性均较好,可用于OA的免疫学检测。