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背角无齿蚌微卫星位点筛选和特征鉴定

苏翔  汪桂玲  李家乐  
【摘要】:采用磁珠富集法,利用生物素标记的(GT)_(15)寡核苷酸探针从背角无齿蚌(Anodonta woodiana)基因组DNA的Sau3A1酶切的250—1000bp片段中筛选微卫星序列。洗脱的杂交片段克隆到PGEM-T载体上构建富集微卫星基因组文库后,通过菌液PCR筛选检测出阳性克隆进行测序。结果表明,在筛选的50个菌落中,得到37条非冗余序列包含有重复次数不少于5次的微卫星位点,阳性克隆率为74.0%,核心重复序列主要为两碱基重复,占所有微卫星序列的86.4%,其中完美型占32.0%,非完美型占10.0%,复合型占8.0%,非完美与复合型共存的占50.0%。其中perfect类型微卫星最大的重复次数为65次。在37条非冗余序列中,共有30条(81.1%)微卫星重复序列两端有侧翼序列能够进行引物设计。本研究中筛选的微卫星位点将为下一步的背角无齿蚌种群遗传结构分析、经济性状的QTL定位和优良品种选育提供遗传标记。

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