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编码中华绒螯蟹蜕皮抑制激素的部分cDNA的克隆和序列分析

王在照  相建海  
【摘要】:从中华绒螯蟹Eriocheir sinensis的眼柄中提取总RNA,以眼柄总RNA为模板进行反转录获得眼柄cDNA.根据日本对虾Penaeus japonicus的具有蜕皮抑制活性的多肽Pej-SGP-Ⅳ的第5-10个氨基酸(NTCRGVMG)和第70-77个氨基酸(WISILNAGQ)分别设计两个兼并引物:上游引物P_1和反向引物P_2.以反转录产物为模板,以P_1和P_2为引物进行RT-PCR反应,经过改变退火温度等方法优化反应条件,得到一条预期大小的特异性的带.将这个特异性的产物克隆到T-载体中测序,通过测序确定该特异性cDNA由215个碱基组成,由这个特异性cDNA推定的多肽由71个氨基酸组成,利用网上在线工具Fasta3查找与这一推定的氨基酸序列相似的蛋白和多肽,可以发现甲壳动物CHH家族的神经肽中蜕皮抑制激素(MIH)与它的相似性最高,其中与它的同源性最高的是刀额新对虾Metapenaeusensis和日本对虾的MIH,同源性比例分别为71.8%和70.4%,通过序列比较和分析,可以判定这个由眼柄特异性cDNA推定的氨基酸序列是中华绒螯蟹的MIH片段,它相当于MIH成熟肽的第5至75个氨基酸序列.

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