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Rv2653c在大肠杆菌中的克隆与表达研究

李邦印  孙卫国  程小星  孙昌文  熊志红  王仲元  王金河  苏锐  
【摘要】:目的从H37Rv标准株克隆出结核菌Rv2653c基因并进行表达与初步分析。方法:根据H37Rv基因组序列合成引物,以PCR方法钓取Rv2653c基因,克隆到pGEM-T上,挑取阳性克隆进行测序,将正确编码基因克隆到pET24b载体上,在BL2大肠杆菌菌株中以IPTG诱导表达重组蛋白。以金属螯合层析初步分离纯化重组蛋白,采用western blot方法对重组抗原进行抗原性初步分析。结果首先获得了重组的Rv2653c编码的蛋白,表达产率不低于20%,初步纯化纯度约90%,以人血清进行的western blot分析发现,Rv2653c重组蛋白有较好的抗原性。结论获得了Rv2653c重组蛋白为进一步寻探讨其功能及应用价值奠定基础。

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