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结核分枝杆菌LAM结合肽的筛选研究

杨华  刘忠华  秦莲花  王洁  郑瑞娟  金瑞良  胡忠义  
【摘要】:目的应用噬菌体随机肽库技术筛选获得结核分枝杆菌(MTB)脂阿拉伯糖甘露聚糖(LAM)结合肽,为进一步研究结核特异性结合肽和以结合肽为基础研制新型结核抗原检测试剂及抗结核药物奠定基础。方法以美国克罗拉多州立大学分枝杆菌研究室免费赠送的LAM为靶分子,利用噬菌体展示技术,从随机七肽库中进行生物淘选。经过3轮吸附-洗脱-扩增的淘选过程,随机挑取18个单噬菌体,培养扩增后,提取单链DNA,以-96位gpⅢ引物进行测序分析。ELISA检测不同单噬菌体与LAM的亲和性,确定阳性克隆,并通过ELISA检测其与MTB标准株H_(37)Rv、临床分离株及非结核分枝杆菌超声破碎物的亲和性。结果获得了6种序列,ELISA检测显示有3种为阳性克隆,其中L2显示出与LAM较强的亲和性。L2与MTB标准株及5株临床分离株超声破碎物的ELISA检测结果同样显示出高亲和性。与9种非结核分枝杆菌超声破碎物的ELISA检测结果显示,L2与草分枝杆菌、龟分枝杆菌及脓肿分枝杆菌3种快生长分枝杆菌具有亲和性,但明显低于MTB,与牛分枝杆菌、耻垢分枝杆菌、瘰疠分枝杆菌、次要分枝杆菌、戈登分枝杆菌及鸟分枝杆菌不具有亲和性,显示出一定特异性。结论利用噬菌体展示随机肽库技术,成功筛选获得了LAM的结合肽,且该结合肽显示出与结核分枝杆菌的高亲和性,并具有一定特异性,为进一步研究结核特异性结合肽奠定了基础。以结合肽为基础,有可能研制出新的LAM检测试剂及具有靶向作用的抗结核药物。

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