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转基因克隆法制作牛乳腺生物反应器

杨东山  海棠  杜晨光  旭日干  
【摘要】:显微注射法的高成本、低效率长期以来制约着转基因动物研究的发展,体细胞核移植技术的出现为转基因动物的制作提供了新的思路。转基因克隆技术使用预先筛选的基因修饰细胞作为核供体,可以大大提高转基因动物的制作效率。理论上所有的转基因克隆动物后代都是转基因动物,但事实并非如此,许多研究表明,利用该方法培育的克隆动物后代中转基因阳性率从0%到100%都存在。本研究通过转基因克隆的方法制作牛乳腺生物反应器,采用组织块贴附培养的方法分离培养约3-4月龄雌性牛胎儿成纤维细胞,采用绿色荧光蛋白基因和新霉素抗性基因两个标记基因与人胰岛素原乳腺特异表达载体一起构建了可以在细胞和胚胎阶段进行双重筛选的转基因载体,采用电穿孔的方法转染体外培养的牛胎儿成纤维细胞, 转基因细胞用G418筛选后,选择表达绿色荧光的细胞用作核供体,核移植胚胎再次经过绿色荧光蛋白筛选后胚胎移植,以确保出生的后代为转基因动物。

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